Описание
Сайт узнавания:
| CA↑TATG |
| GTAT↓AC |
Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген FauND I из Flavobacterium aquatili ND
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер Y
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 50 | 75 | 10 | 50 | 100 | 100 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0,1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 1mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 10-кратным избытком фермента 80% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. В присутствии 10% PEG сшивка проходит лучше.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированию: не проверялось
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA (кроме E009T и E010T).
Для фасовок Turbo (E009T и E010T) прикладывается только буфер ROSE.
Примечание:
Фермент чувствителен к примесям в некоторых ДНК. Например, ДНК очищенная по стандартному минипрепаративному протоколу гидролизуется плохо.
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл.
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
Шевченко A.В., Беличенко O.A., Мякишева T.В., Дедков В.С., Абдурашитов M.A., Дегтярев С.Х. Неопубликованные данные (1995).
Репин В.Е., Польшина С.В., Божко Н.А., Дегтярев С.Х. Культивирование Bacillus species 21 — продуцента эндонуклеазы рестрикции Bse21I. // Извести СО АН СССР, Серия биологических наук, вып.1, 108-111 (1989).
