Быстрый гидролиз ДНК эндонуклеазами рестрикции Turbo
Стандартный протокол и условия для ферментов категории Turbo.
Свойства эндонуклеаз рестрикции категории Turbo
Ферменты категории Turbo протестированы на способность гидролизовать ДНК в течение короткого промежутка времени.
При проведении теста 1 мкл фермента Turbo добавляли в реакционную смесь, содержащую 1 мкг ДНК (фаговой или плазмидной) и однократный универсальный буфер ROSE (для некоторых ферментов — собственный оптимальный буфер), и после инкубации в течение 10 или 15 мин наблюдали картину полного гидролиза субстрата.
Стандартный протокол реакции быстрого гидролиза
10× SE-буфер ROSE (или оптимальный буфер)
2 мкл
Препарат ДНК
0,2–1 мкг
BSA (10 мг/мл) (опционно)*
0,2 мкл
Стерильная вода
до 20 мкл
+ 1 мкл эндонуклеазы рестрикции Turbo
/ либо по 1 мкл каждой из двух рестриктаз Turbo при двойном гидролизе.
- Аккуратно перемешать смесь.
- Инкубировать при оптимальной температуре в течение 10 или 15 минут.
* Добавляется в реакцию, если BSA необходим для достижения ферментом максимальной активности.
Примечание
Данные ферменты применяются только в неразбавленном виде. Для проведения быстрого гидролиза следует использовать препараты ДНК высокой степени очистки (особенно это касается ПЦР-фрагментов).
Для достижения полного гидролиза некоторых продуктов ПЦР и суперскрученной формы плазмидной ДНК может потребоваться больше времени, чем 10–15 минут, вследствие более низкой их способности расщепляться.