Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| RG(5mC)Y | ↑RG(5mC)Y |
| RG(5mC)Y | ↓RG(5mC)Y |
Источник: Arthrobacter oxydans 25K
Определение единицы активности:
За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое для полного гидролиза линейной формы 1 мкг плазмиды pMHaeIII/DriI за 1 час при 60°С в 50 мкл реакционной смеси. При этом происходит исчезновение исходной линейной формы плазмиды pMHaeIII/DriI (см. рисунок ниже, дор. 4).
| Определение активности AoxI В каждом случае проводилась инкубация фермента с 1 мкг ДНК pMHaeIII/DriI в 50 мкл реакционной смеси (см. Единица активности). После инкубации аликвота реакционной смеси 15 мкл наносилась на гель. Дорожки: 1: исходная ДНК pMHaeIII/DriI 2: 0.5 мкл Aox I 3: 1 мкл Aox I 4: 2 мкл Aox I 5: 1 Kb SE ДНК-маркеры Продукты разделены в 1%-ном агарозном геле в буфере TAE. |
 |
Субстрат для определения активности:
Субстрат pMHaeIII/DriI представляет собой ДНК плазмиды pMHaeIII, линеаризованной эндонуклеазой рестрикции DriI. Плазмида pMHaeIII содержит ген ДНК-метилтрансферазы M.HaeIII из Haemophilus aegyptuus, которая модифицирует сайт узнавания
5` GGCC 3` с образованием 5` GG(5mC)C 3`/3` C(5mC)GG 5`.
Оптимальный буфер: SE-буфер AoxI
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 75 | 25 | 10 | 25 | 75 | 100 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.4); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Лигирование:
Неспецифический гидролиз:
Не наблюдается неспецифического гидролиза при инкубации 1 ед фермента Aox I с 1 мкг ДНК фага лямбда в течение 16 часов при 60°С в 50 мкл реакционной смеси.
Чувствительность к метилированию: Фермент расщепляет только метилированную ДНК.
Не расщепляет немодифицированную ДНК .
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер AoxI.
Примечание:
Литература:
1. Чернухин В.А., Беличенко О.А., Тарасова Г.В., Гончар Д.А., Акишев А.Г., Дедков В.С., Михненкова Н.А., Дегтярев С.Х. Штамм бактерии Arthrobacter oxydans – продуцент сайт-специфической эндонуклеазы Aox I. // Патент на изобретение RU 2399663 С1 (2009).
