Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| GCGC | GCG↑C |
| CGCG | C↓GCG |
Источник: Arthrobacter species LE3860
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер O
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 10 | 75 | 100 | 50 | 25 | 100 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 100 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Фермент чувствителен к CpG метилированию
Чувствительность к метилированию: Блокируется CG метилированием
5`- G(5mC)GC – 3`/3`- CG(5mC)G – 5`
Не блокируется при метилировании
5`- GCG(5mC) – 3`/3`- (5mC)GCG – 5` и
5`- GCG(5mC) – 3`/3`- CGCG – 5`.
Гидролизует полуметилированный по внутреннему цитозину сайт: 5`-G(5mC)GC-3`/3`-СGCG-5`
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер O.
Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.
Примечание:
Литература:
Высоцая E.M., Гончар Д.A., Шевченко A.В., Абдурашитов M.A., Дегтярев С.Х. Неопубликованные данные (1998).
