Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| (N)8GACNNNNNNTTYG(N)11 | ↑(N)8GACNNNNNNTTYG(N)11↑ |
| (N)13CTGNNNNNNAARC(N)6 | ↓(N)13CTGNNNNNNAARC(N)6↓ |
Источник: Arthrobacter species NTS
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага T7 за 1 час при 30°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага Т7
Оптимальный буфер: SE-буфер Y
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 100 | 20 |
Условия хранения: 10 mM KH2PO4(pH 7.4); 200 mM KCl; 0,1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA, 7 mM2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 3-кратным избытком фермента около 70% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 80% из них могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 1 ед фермента в течение 16 часов при 30°С.
Чувствительность к метилированию: не проверялось
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA.
Примечание:
BSA при длительной инкубации использоватьне рекомендуется.
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл.
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
