Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| CAGCTG | CAG↑CTG |
| GTCGAC | GTC↓GAC |
Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген PvuII из Proteus vulgaris
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер G
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 25 | 100 | 25 | 25 | 25 | 100 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 300 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 1 mM DTT; 100 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 20-кратным избытком фермента около 70% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированию: не проверялось
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G, BSA.
Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE+.
Примечание:
Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности.
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл.
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
Дегтярев С.Х., Репин В.Е., Речкунова Н.И. Штамм бактерий Proteus vulgaris – продуцент рестриктазы PvuII. // Авторское свидетельство SU 1632974 (1991).
В.А. Чернухин, М.А. Абдурашитов, В.Н. Томилов, Д.А. Гончар, С.Х. Дегтярев Сравнительный рестрикционный анализ хромосомной ДНК крысы in vitro и in silico // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова, 2006, т. 2, №3, с. 39-46
