Описание
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| GGTCTC(N)1 | GGTCTC(N)1↑ |
| CCAGAG(N)6 | CCAGAG(N)6↓ |
Источник: Peribacillus species 31
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, способное гидролизовать 1 мкг T7-ДНК в 50 мкл реакционной смеси в SE-буфере Y при 37°С за 1 час.
Субстрат для определения активности:
T7-ДНК
Оптимальный буфер: SE-буфер Y
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 25-50 | 75-100 | 10-25 | 25-50 | 100 | 75 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5), 200 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 200 мкг/мл BSA, 7 mM 2-меркаптоэтанол, 50% глицерин; Хранить при -20°С
Лигирование:
После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и около 90% из них могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. BSA при длительной инкубации использовать
не рекомендуется.
Чувствительность к метилированию: Блокируется на 90-95% при перекрывании mCG метилированием: 5′-GGTCT(5mC)G-3′ и/или 5′-GAGAC(5mC)G-3′.
С ферментом поставляется: 10 x SE-Буфер Y, BSA (10 мг/мл).
Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.
