AsuHP I

Название ферментаAsuHP I
ПрототипHphI
Известные аналогиHphI
АртикулSE-E231
Вариант TurboОтсутствует
Высококонцентрированная версияОтсутствует
Тип рестриктазыТип IISiФерменты типа IIS распознают асимметричные последовательности ДНК и разрезают за пределами сайта узнавания на фиксированном расстоянии. Широко используются в Golden Gate сборке.
Сайт узнавания
5'… GGTGA(N)8▼ …3'
3'… CCACT(N)7▲ …5'
ИсточникИз штамма E.coli, несущего клонированный ген AsuHP I из Actinobacillus suis HP.
Оптимальный буферSE-буфер O (50 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура37 °C
Температура инактивации65 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
10-2550-7510075-10025-50100
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, способное гидролизовать 1 мкг λ-ДНК в 50 мкл реакционной смеси в SE-буфере O при 37°С за 1 час.
Субстрат для определения активностиДНК фага лямбда (dam-)
Условия хранения15 mM Tris-HCl (pH 7.5), 250 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 200 мкг/мл BSA, 7 mM 2-меркаптоэтанол, 50% глицерин; Хранить при -20°С.
ЛигированиеПосле гидролиза 5-кратным избытком фермента около 30% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированиюБлокируется dam-метилированием при перекрывании (G m ATC): GGT GA TC
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер O.
ПримечанияФермент также может гидролизовать ДНК в положении 9/8 в зависимости от последовательности между сайтомузнавания и местом расщепления.
Литература
  2. V.S. Dedkov, S.Kh. Degtyarev Actinobacillus and Streptococcus: producers of isoschizomers of the restriction endonucleases R.Hph I, R.Sau I, R.Nhe I, R.Mbo I and R.Swa I. // Biol. Chem., Vol. 379, 573-574, (1998). (На английском)
// Код для некролога