PciS I

Название ферментаPciS I
ПрототипSapI
Известные аналогиLguI, SapI
АртикулSE-E497
Вариант TurboОтсутствует
Высококонцентрированная версияОтсутствует
Тип рестриктазыТип IISiФерменты типа IIS распознают асимметричные последовательности ДНК и разрезают за пределами сайта узнавания на фиксированном расстоянии. Широко используются в Golden Gate сборке.
Сайт узнавания
5'… GCTCTTCN▼ …3'
3'… CGAGAAG(N)4▲ …5'
ИсточникPlanococcus citreus S
Оптимальный буферSE-буфер B (10 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура37 °C
Температура инактивации65 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
10050007550
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активностиДНК фага лямбда
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0,1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
ЛигированиеПосле гидролиза 3-кратным избытком фермента около 90% фрагментов ДНК сшиваются Т4 ДНК-лигазой и около 95% из них могут быть повторно расщеплены
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 0.5 ед фермента в течение 16 часов при 37°С
Чувствительность к метилированиюне проверялось
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер B.
Литература
  1. Неопубликованные данные Чернухин В.А, Килева Е.В., Томилова Ю.Э., Дедков В.С Неопубликованные данные (2006).
// Код для некролога