Сравнительный рестрикционный анализ хромосомной ДНК крысы in vitro и in silico
// Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю.А.Овчинникова, Т. 2 №3. – С. 39-46 (2006).
Pct I
| Название фермента | Pct I | ||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Прототип | BsmI | ||||||||||||
| Известные аналоги | BsaMI, BsmI, Mva1269I | ||||||||||||
| Артикул | SE-E045 | ||||||||||||
| Вариант Turbo | Отсутствует | ||||||||||||
| Высококонцентрированная версия | Отсутствует | ||||||||||||
| Тип рестриктазы | Тип IISiФерменты типа IIS распознают асимметричные последовательности ДНК и разрезают за пределами сайта узнавания на фиксированном расстоянии. Широко используются в Golden Gate сборке. | ||||||||||||
| Сайт узнавания | 5'… GAATGCN▼ …3' 3'… CTTAC▲GN …5' |
||||||||||||
| Источник | Planococcus citreus SM | ||||||||||||
| Оптимальный буфер | SE-буфер O (50 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT.) | ||||||||||||
| Оптимальная температура | 37 °C | ||||||||||||
| Температура инактивации | 65 °C | ||||||||||||
| Активность в буферах |
|
||||||||||||
| Определение единицы активности | За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. | ||||||||||||
| Субстрат для определения активности | ДНК фага лямбда | ||||||||||||
| Условия хранения | 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 250 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 100 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С. | ||||||||||||
| Лигирование | После гидролиза 10-кратным избытком фермента >90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены | ||||||||||||
| Неспецифический гидролиз | Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 37°С | ||||||||||||
| Чувствительность к метилированию | не проверялось | ||||||||||||
| С ферментом поставляется | 10 Х SE-буфер O. | ||||||||||||
| Примечания | |||||||||||||
| Литература |