PspX I

Название ферментаPspX I
ПрототипPspXI
АртикулSE-E477
Вариант TurboДоступен
Высококонцентрированная версияДоступна
Тип рестриктазыТип IIPiФерменты типа IIP — классические рестриктазы типа II с палиндромными сайтами узнавания и симметричными сайтами разрезания.
Сайт узнавания
5'… VC▼TCGAGB …3'
3'… BGAGCT▲CV …5'
ИсточникИз штамма E.coli несущего клонированный ген PspX I из Pseudomonas species A1-1
Оптимальный буферSE-буфер Y (33 mM Tris-ацетат (pH 7.9 при 25°C); 10 mM магний-ацетат; 66 mM калий-ацетат; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура37 °C
Температура инактивации80 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
5050257510025
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (HindIII-digest) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активностиДНК фага лямбда (HindIII - digest)
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
ЛигированиеПосле гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированиюне проверялось
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер Y, BSA. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.
ПримечанияДля достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература
  1. В.А. Чернухин, Ю.Э. Каширина, Ю.Э. Томилова, Д.А. Гончар, В.С. Дедков, Н.А. Михненкова, С.Х. Дегтярев Новая сайт-специфическая эндонуклеаза AbsI из Arthrobacter species 7М06 узнает октануклеотидную палиндромную последовательность ДНК 5’-CC^TCGAGG-3’. // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю.А.Овчинникова,Т2, №2, С.29-34 (2006).
  2. Д.А. Гончар, М.А. Абдурашитов, О.А. Беличенко, В.С. Дедков, Н.В. Мезенцева, Ю.Э. Томилова, С.Х. Дегтярев Новая эндонуклеаза рестрикции PspXI узнает необычную последовательность ДНК 5′-VC^TCGAGB-3′. // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю.А.Овчинникова, №1, С. 18-23 (2005).
// Код для некролога