Sfi I

Название ферментаSfi I
ПрототипSfiI
АртикулSE-E123
Вариант TurboДоступен
Высококонцентрированная версияДоступна
Тип рестриктазыТип IIPiФерменты типа IIP — классические рестриктазы типа II с палиндромными сайтами узнавания и симметричными сайтами разрезания.
Сайт узнавания
5'… GGCCNNNN▼NGGCC …3'
3'… CCGGN▲NNNNCCGG …5'
ИсточникИз штамма E.coli несущего клонированный ген Sfi I из Streptomyces fimbriatus
Оптимальный буферSE-буфер G (10 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 50 mM NaCl; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура50 °C
Температура инактивации65 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
7510025252575
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага T7 за 1 час при 50°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активностиДНК фага Т7
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
ЛигированиеПосле гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. В присутствии 10% ПЭГ сшивка более эффективна.
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 50°С.
Чувствительность к метилированиюБлокируется при перекрывании dcm метилированием (C m CWGG) GG CCWGG NNNGGCC.Не блокируется при перекрывании dcm метилированием (C m CWGG) GGCCNNNNNNGG CCWGG.
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер G, BSA. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.
ПримечанияПри 37°C активность 75%-100% от максимальной. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература
  2. В.Е. Репин, Т.К. Малуп, А.А. Николаенкова, Н.И. Речкунова, С.М. Свиридов, С.Х. Дегтярев Способ получения биомассы Streptomyces, обогащенной эндонуклеазой рестрикции SfiI. // Авторское свидетельство SU 1701745 (1991).
  3. В.Е. Репин, С.Х. Дегтярев, Н.Н. Карпышев, В.Е. Чижиков Фрагмент нуклеиновой кислоты для тестирования крупнощепящих рестриктаз SfiI и NotI и рекомбинантная плазмидная ДНК pDKR 85 для тестирования крупнощепящих рестриктаз SfiI и NotI. // Авторское свидетельство SU 1433020 (1986).
  4. Сторонняя публикация Qiang, B.-Q., Schildkraut, I. Nucleic Acids Res. 12: 4507-4515 (1984).
// Код для некролога