Sse9 I

Название ферментаSse9 I
ПрототипTsp509I
Известные аналогиMluCI, TasI, Tsp509I, TspEI
АртикулSE-E217
Вариант TurboДоступен
Высококонцентрированная версияОтсутствует
Тип рестриктазыТип IIPiФерменты типа IIP — классические рестриктазы типа II с палиндромными сайтами узнавания и симметричными сайтами разрезания.
Сайт узнавания
5'… ▼AATT …3'
3'… TTAA▲ …5'
ИсточникИз штамма E.coli несущего клонированный ген Sse9 I из Sporosarcina species 9
Оптимальный буферSE-буфер B (10 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура55 °C
Температура инактивации65 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
1007550507575
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг pBR322 ДНК за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активностиpBR322 ДНК
Условия хранения10 mM Tis-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
ЛигированиеПосле гидролиза 5-кратным избытком фермента более 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 55°С.
Чувствительность к метилированиюБлокируется метилированием: 5`-A(m6A)TT-3`/ 3`-TT(m6A)A-5`.
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер B, BSA. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.
ПримечанияПри 37°С активность ~75% от максимальной. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература
  1. Д.А. Гончар, М.А. Абдурашитов, С.С. Охапкина, Д.А. Шагин, Е.В. Килева, С.Х. Дегтярев Система рестрикции-модификации Sse9I: организация генов и сравнительный анализ структуры белков . // Молекулярная биология, т.41, №3, с. 491-498 (2007).
  5. Д.А. Гончар, В.С. Дедков, В.А. Верхозина, Ю.С. Куснер, А.В. Шевченко, С.Х. Дегтярев Эндонуклеаза рестрикции Sse9I из штамма Sporosarcina sp. 9D, узнающая последовательность ДНК 5′-AATT-3′. // Прикладная биохимия и микробиология, т.34, №2, 139-141 (1998).
  6. D.A. Gonchar, Yu.I. Wolf, S.Kh. Degtyarev Cloning and characterization of Sse9I DNA Methyltransferase recognizing 5′-AATT-3′. // Nucleic Acids Research, Vol. 24, No 14., 2790-2792 (1996). (На английском)
// Код для некролога