Ssp I

Название ферментаSsp I
ПрототипSspI
АртикулSE-E041
Вариант TurboДоступен
Высококонцентрированная версияОтсутствует
Тип рестриктазыТип IIPiФерменты типа IIP — классические рестриктазы типа II с палиндромными сайтами узнавания и симметричными сайтами разрезания.
Сайт узнавания
5'… AAT▼ATT …3'
3'… TTA▲TAA …5'
ИсточникИз штамма E.coli несущего клонированный ген Ssp I из Sphaerotilus species
Оптимальный буферSE-буфер K (10 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM KCl; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура37 °C
Температура инактивации65 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
7550255075100
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активностиДНК фага лямбда
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
ЛигированиеПосле гидролиза 10-кратным избытком фермента 90% фрагментов ДНК сшиваются T4 ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированиюБлокируется метилированием A m ATATT.
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер K, BSA. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE+.
ПримечанияБольшой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература
// Код для некролога