Гидролиз ДНК эндонуклеазами рестрикции, требующими BSA

Протоколы для рестриктаз, требующих BSA (бычий сывороточный альбумин) для максимальной активности.

О BSA и его применении

Некоторые эндонуклеазы рестрикции требуют присутствия BSA в реакционной смеси (до 100 мкг/мл) для стабилизации фермента.
BSA поставляется как водный раствор 10 мг/мл (100×), добавляют 0,2 мкл на 20 мкл смеси или 0,5 мкл на 50 мкл.
Для удобства концентрат можно развести в 10 раз стерильной водой и вносить объёмом 1/10 от объёма реакции.
Хранить при −20 °C, после размораживания перемешать встряхиванием/пипетированием.

Стандартный протокол: фаговая/хромосомная ДНК

Объём реакции: 20 мкл
10× опт./универсальный буфер
2 мкл
Препарат ДНК (0,1–0,5 мкг/мкл)
2 мкл
BSA (10 мг/мл)
0,2 мкл
Стерильная вода
до 20 мкл
+ 1–2 мкл (1–20 е.а.) рестриктазы
  1. Аккуратно перемешать.
  2. Инкубировать при оптимальной температуре 0,5–1 ч (в отдельных случаях — 3–4 ч).

Протокол: плазмидная ДНК / ПЦР-фрагмент

Объём реакции: 20 мкл
10× опт./универсальный буфер
2 мкл
Плазмидная ДНК / ПЦР-фрагмент
0,2–1,0 мкг
BSA (10 мг/мл)
0,2 мкл
Стерильная вода
до 20 мкл
+ 2 мкл (2–50 е.а.) рестриктазы
  1. Аккуратно перемешать.
  2. Инкубировать при оптимальной температуре 1–1,5 ч (в отдельных случаях — 4–16 ч).

Важно: при длительных инкубациях (>4 ч) не рекомендуется добавлять BSA — возможно появление неспецифической («звёздчатой») активности рестриктаз.