Описание
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| TTSAA | TTS↑AA |
| AASTT | AA↓STT |
Источник: Agrococcus species 25
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага Лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага Лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер Y
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 75 | 50 | 10 | 10 | 100 | 50 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl(pH 7.5); 100 mM KCl; 0,1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA, 7 mM2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 5-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированию: Блокируется метилированием: 5`-TTSA(m6A)-3`/ 3`-(m6A)ASTT-5`.
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA
Примечание:
BSA при длительной инкубации использоватьне рекомендуется.
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл.
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
