Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| GGGCCC | GGGCC↑C |
| CCCGGG | C↓CCGGG |
Источник: Из штамма E.coli, несущего клонированный ген ApaI из Acetobacter pasteurianus.
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда/BamHI за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда/BamHI
Оптимальный буфер: SE-буфер Y
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 50 | 25 | 100 | 50 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°C.
Лигирование:
После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°C.
Чувствительность к метилированию: Блокируется при перекрывании Dcm-метилированием (CmCWGG): GGGCCCWGG.
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA (кроме E019T и E020T)
Для фасовок Turbo (E019T и E020T) прикладывается буфер ROSE.
Примечание:
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл.
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
Seurinck, J., Van de Voorde, A., Van Montagu, M. Nucleic Acids. Res.11: 4409-4415 (1983).
