Описание
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| GATNNNNATC | GATNN↑NNATC |
| CTANNNNTAG | CTANN↓NNTAG |
Источник: Bacillus species 8
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 60°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер G
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 25 | 100 | 75 | 75 | 50 | 100 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 100 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 5-кратным избытком фермента около 80% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 60°С.
Чувствительность к метилированию:
Блокируется Dam-метилированием при перекрывании (GmATC): 5’-GmATCN^NNATC-3’/3’-CTmAGN^NNTAG-5’.
Блокируется (5mC)-метилированием при перекрывании: 5’-GATNN^NNAT(5mC)-3’/3’-(5mC)TANN^NNTAG-5’.
Гидролизует полуметилированный сайт: 5’-GATNN^NNAT(5mC)-3’/3’-CTANN^NNTAG.
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G
Примечание:
При более чем 5-кратном избытке фермента на 1 мкг ДНК наблюдается звездчатая активность.
Литература:
Репин В.E., Серов Г.Д., Пучкова Л.И., Терещенко T.A., Лебедев Л.Р., Чижиков В.E. Биоорг. Хим. 19: 583-585 (1993).
