Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| CCATGG | C↑CATGG |
| GGTACC | GGTAC↓C |
Источник: Bacillus species 19
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер 2W
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 10 | 50 | 75 | 10 | 5 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированию: Bsp19I гидролизует полуметилированный по первому цитозину сайт
5`-(5mC)CATGG-3`/3`-GGTACC-5`
и не гидролизует метилированные сайты
5`-(5mC)CATGG-3`/3`-GGTAC(5mC)-5` и
5`-(4mC)CATGG-3`/3`-GGTAC(4mC)-5`.
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер 2W, BSA (кроме E047T и E048T).
Для фасовок Turbo (E047T и E048T) прикладывается буфер 2W+.
Примечание:
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
Репин В.E., Речкунова Н.И., Дегтярев С.Х. Неопубликованные данные.
Репин В.E., Лебедев Л.Р., Андреева И.С., Пучкова Л.И., Зернов Ю.П., Серов Г.Д., Терещенко T.A., Афиногенова Г.Н., Пустошилова Н.M. Биотехнология 0: 18-27 (1998).
В.А. Чернухин, М.А. Абдурашитов, В.Н. Томилов, Д.А. Гончар, С.Х. Дегтярев Сравнительный рестрикционный анализ хромосомной ДНК мыши in vitro и in silico // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова, 2007, 3, №4, с. 19-27.
