Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| CTCTTCN | CTCTTCN↑ |
| GAGAAG(N)4 | GAGAAG(N)4↓ |
Источник: Bacillus stearothermophilus 6
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 65°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер Y
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 75 | 75 | 50 | 75 | 100 | 100 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°C. Для периода более 30 дней рекомендуется хранить при -70°C.
Лигирование:
После гидролиза 2-кратным избытком фермента 80% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и около 80% из них могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 65°C.
Чувствительность к метилированию: не проверялось
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA
Примечание:
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
Abdurashitov, M.A., Dedkov, V.S., Kileva, E.V., Popichenko, D.V., Degtyarev, S.K. Unpublished observations.(2001)
В.А. Чернухин, М.А. Абдурашитов, В.Н. Томилов, Д.А. Гончар, С.Х. Дегтярев Сравнительный рестрикционный анализ хромосомной ДНК крысы in vitro и in silico // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова, 2006, т. 2, №3, с. 39-46
