Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| GAGCTC | GAG↑CTC |
| CTCGAG | CTC↓GAG |
Источник: Из Escherichia coli ICR
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (HindIII-digest) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда (HindIII-digest)
Оптимальный буфер: SE-буфер G
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 75 | 100 | 75 | 5 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200мкг/мл BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированию: не проверялось
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G, BSA.
Примечание:
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл.
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
Sugisaki H., Maekawa Y., Kanazawa S., Takanami M. Bull. Inst. Chem. Res. Kyoto Univ. 60: 328-335 (1982).Yankovsky N.K., Fonstein M.Yu., Lashina S.Yu., Bukanov N.O., Yakubovich N.V., Ermakova L.M., Rebentish B.A., Janulaitis A., Debabov V.G. Gene 81: 203-210 (1989).
