Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| TGGCCA | TGG↑CCA |
| ACCGGT | ACC↓GGT |
Источник: Microbacterium oxydans
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда (dcm-)
Оптимальный буфер: SE-буфер O
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 10 | 25 | 100 | 75 | 25 | 75 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM KCl; 0,1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 20-кратным избытком фермента около 80% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Более полная сшивка достигается при добавлении 10 % ПЭГ.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированию: Блокируется при перекрывании dcm-метилированием (CmCWGG): TGGCCAGG.
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер O
Примечание:
Литература:
Чернов A.П., Беличенко O.A., Речкунова Н.И., Андреева И.С., Репин В.E., Дегтярев С.Х. Российское бюро патентов (1993).SU 1806191 A3
Абдурашитов М. А, Чернухин В. А., Томилов В. Н., Гончар Д. А., Дегтярев С. Х. Рестрикционный анализ ДНК человека – новые возможности в ДНК-диагностике // Медицинская генетика, Т.6, № 8, с 29-36, 2007
