Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| GGCCGGCC | GGCCGG↑CC |
| CCGGCCGG | CC↓GGCCGG |
Источник: Rhizobium yangligense
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК Аденовируса-2 за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК Аденовируса-2
Оптимальный буфер: SE-буфер RigI + BSA
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 75 | 50 | 10 | 50 | 10 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM KCl;0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 mkg/ml BSA, 50% глицерин.
При -20ºC хранить не более 7 дней. При более длительном сроке хранения рекомендуется -70°С.Лигирование:
После гидролиза 3-кратным избытком фермента более 90% фрагментов Ad2 ДНК сшиваются Т4 ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг Ad2 ДНК 4 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.Чувствительность к метилированию: Блокируется mCG и GmC метилированием:
5`-GGC(m5C)GGCC-3`/3`-CCGG(m5C)CGG-5` и
5`-GG(m5C)CGG(m5C)C-3`/3`-C(m5C)GGC(m5C)GG-5`
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер RigI, BSA(10 мг/мл).
Примечания: Для достижения 100% активности в реакционную смесь следует добавить BSA до концентрации 100 мкг/мл.
