Быстрый гидролиз ДНК эндонуклеазами рестрикции Turbo

 

Свойства эндонуклеаз рестрикции категории Turbo:

Ферменты категории Turbo протестированы на способность гидролизовать ДНК в течение короткого промежутка времени. При проведении теста 1 мкл фермента Turbo добавляли в реакционную смесь, содержащую 1 мкг ДНК (фаговой или плазмидной) и однократный универсальный буфер ROSE (для некоторых ферментов – собственный оптимальный буфер), и после инкубации в течение 10 или 15 мин наблюдали картину полного гидролиза субстрата.

 

Стандартный протокол реакции быстрого гидролиза:

На 20 мкл реакционной смеси:
10х SE-буфер ROSE (или оптимальный буфер)   – 2 мкл

Препарат ДНК                                                           – 0,2-1 мкг

BSA (10 мг/мл) (опционно)*                                    – 0,2 мкл
Стерильная вода                                                        – до 20 мкл

+ 1 мкл эндонуклеазы рестрикции Turbo (либо по 1 мкл каждой из двух рестриктаз Turbo в случае двойного гидролиза).

 

Аккуратно перемешать смесь.

Инкубировать при оптимальной температуре в течение 10 или 15 мин.

 

*добавляется в реакцию, если BSA необходим для достижения ферментом максимальной активности.

 

Примечание:
Данные ферменты применяются только в неразбавленном виде. Для проведения быстрого гидролиза следует использовать препараты ДНК высокой степени очистки (особенно это касается ПЦР-фрагментов). Для достижения полного гидролиза некоторых продуктов ПЦР и суперскрученной формы плазмидной ДНК может потребоваться больше времени, чем 10-15 мин, вследствие более низкой их способности расщепляться.