Acc36 I

Название ферментаAcc36 I
ПрототипBspMI
Известные аналогиBfuAI, BspMI, BveI
АртикулSE-E289
Вариант TurboОтсутствует
Высококонцентрированная версияОтсутствует
Тип рестриктазыТип IIEiФерменты типа IIE взаимодействуют с двумя сайтами узнавания: один сайт разрезается, а второй действует как аллостерический эффекторный сайт., Тип IISiФерменты типа IIS распознают асимметричные последовательности ДНК и разрезают за пределами сайта узнавания на фиксированном расстоянии. Широко используются в Golden Gate сборке.
Сайт узнавания
5'… ACCTGC(N)4▼ …3'
3'… TGGACG(N)8▲ …5'
ИсточникAcinetobacter calcoaceticus 36
Оптимальный буферSE-буфер Y (33 mM Tris-ацетат (pH 7.9 при 25°C); 10 mM магний-ацетат; 66 mM калий-ацетат; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура37 °C
Температура инактивации65 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
25255050100100
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активностиДНК фага лямбда
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 100 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
ЛигированиеПосле гидролиза 3-кратным избытком фермента 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 4 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированиюне проверялось
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер Y
ПримечанияИзбыток фермента приводит к появлению звездчатой активности.
Литература
  1. Неопубликованные данные Гончар Д.A., Шинкаренко Н.M., Дедков В.С., Дегтярев С.Х Неопубликованные данные. 1999
// Код для некролога