Apa I

Название ферментаApa I
ПрототипApaI
Известные аналогиBsp120I, PspOM I
АртикулSE-E019
Вариант TurboДоступен
Высококонцентрированная версияОтсутствует
Тип рестриктазыТип IIPiФерменты типа IIP — классические рестриктазы типа II с палиндромными сайтами узнавания и симметричными сайтами разрезания.
Сайт узнавания
5'… GGGCC▼C …3'
3'… C▲CCGGG …5'
ИсточникИз штамма E.coli, несущего клонированный ген ApaI из Acetobacter pasteurianus.
Оптимальный буферSE-буфер Y (33 mM Tris-ацетат (pH 7.9 при 25°C); 10 mM магний-ацетат; 66 mM калий-ацетат; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура37 °C
Температура инактивации65 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
50250010050
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда/BamHI за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активностиДНК фага лямбда/BamHI
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°C.
ЛигированиеПосле гидролиза 20-кратным избытком фермента более 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°C.
Чувствительность к метилированиюБлокируется при перекрывании Dcm-метилированием (C m CWGG) GGGC CC WGG.
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер Y, BSA (кроме E019T и E020T) Для фасовок Turbo (E019T и E020T) прикладывается буфер ROSE.
ПримечанияДля достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература
  1. Сторонняя публикация Seurinck, J., Van de Voorde, A., Van Montagu, M. Nucleic Acids. Res.11: 4409-4415 (1983).
// Код для некролога