Bsa29 I

Название ферментаBsa29 I
ПрототипClaI
Известные аналогиBanIII, BseCI, BspDI, BspXI, Bsu15I, BsuTUI, ClaI, ZhoI
АртикулSE-E205
Вариант TurboДоступен
Высококонцентрированная версияОтсутствует
Тип рестриктазыТип IIPiФерменты типа IIP — классические рестриктазы типа II с палиндромными сайтами узнавания и симметричными сайтами разрезания.
Сайт узнавания
5'… AT▼CGAT …3'
3'… TAGC▲TA …5'
ИсточникBacillus stearothermophilus 29
Оптимальный буферSE-буфер G (10 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 50 mM NaCl; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура37 °C
Температура инактивации65 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
25100505075100
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (dam-) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активностиДНК фага лямбда (dam-)
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 250 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
ЛигированиеПосле гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированиюБлокируется при перекрывании dam-метилированием (G m ATC) G ATCGAT C. Блокируется CG метилированием.
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер G, BSA (кроме E205T и E206T). Для фасовок Turbo (E205T и E206T) прикладывается только буфер ROSE.
ПримечанияДля достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература
  1. Г.Г. Приходько, Н.А. Петров, В.Е. Репин, С.Х. Дегтярев Установление субстратной специфичности эндонуклеазы рестрикции Bsu15I. // Известия СО АН СССР, Серия биологических наук, вып.2, 108-109 (1989).
  2. Неопубликованные данные Репин В.E., Дегтярев С.Х Непубликованные данные
// Код для некролога