Новая сайт-специфическая эндонуклеаза BspACI из BACILLUS PSYCHRODURANS AC узнает последовательность 5`-C^CGC-3`/3`-GGC^G-5`. // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю.А.Овчинникова, Т5, №1, С. 16-24 (2009).
BspAC I
| Название фермента | BspAC I | ||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Прототип | AciI | ||||||||||||
| Известные аналоги | AciI, SsiI | ||||||||||||
| Артикул | SE-E501 | ||||||||||||
| Вариант Turbo | Отсутствует | ||||||||||||
| Высококонцентрированная версия | Отсутствует | ||||||||||||
| Сайт узнавания | 5'… C▼CGC …3' 3'… GGC▲G …5' | ||||||||||||
| Источник | Bacillus species AC | ||||||||||||
| Оптимальный буфер | SE-буфер O (50 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT.) | ||||||||||||
| Оптимальная температура | 37 °C | ||||||||||||
| Температура инактивации | 65 °C | ||||||||||||
| Активность в буферах |
| ||||||||||||
| Определение единицы активности | За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. | ||||||||||||
| Субстрат для определения активности | ДНК фага лямбда | ||||||||||||
| Условия хранения | 10 mM KH 2 PO 4 (pH 7.2); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 100 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С. | ||||||||||||
| Лигирование | После гидролиза 5-кратным избытком фермента более 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 50% из них могут быть повторно расщеплены. | ||||||||||||
| Неспецифический гидролиз | Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. | ||||||||||||
| Чувствительность к метилированию | Блокируется CG метилированием. | ||||||||||||
| С ферментом поставляется | 10 Х SE-буфер O, BSA | ||||||||||||
| Примечания | Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется. | ||||||||||||
| Литература |