Fal I

Название ферментаFal I
ПрототипFalI
АртикулSE-E153
Вариант TurboОтсутствует
Высококонцентрированная версияОтсутствует
Тип рестриктазыТип IIBiФерменты типа IIB разрезают ДНК по обе стороны от сайта узнавания, обычно вырезая короткий фрагмент ДНК, содержащий этот сайт., Тип IIPiФерменты типа IIP — классические рестриктазы типа II с палиндромными сайтами узнавания и симметричными сайтами разрезания.
Сайт узнавания
5'… ▼(N)8AAGNNNNNCTT(N)13▼ …3'
3'… ▲(N)13TTCNNNNNGAA(N)8▲ …5'
ИсточникFlavobacterium aquatile Ob10
Оптимальный буферSE-буфер W (10 mM Tris-HCl (pH 8.5 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура37 °C
Температура инактивации65 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
025751005070
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активностиДНК фага лямбда
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 250 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
ЛигированиеПосле гидролиза 3-кратным избытком фермента 20% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 80% из них могут быть повторно расщеплены. В присутствии 10% ПЭГ сшивка проходит лучше
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 37°С
Чувствительность к метилированиюне проверялось
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер W, SAM.
ПримечанияБольшой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности. Для достижения 100% активности SAM следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 0.01 mM.
Литература
  2. Неопубликованные данные Дедков В.С., Синичкина С.А., Абдурашитов M.A., Попиченко Д.В., Дегтярев С.Х Неопубликованные данные (2001).
// Код для некролога