Mbo II

Название ферментаMbo II
ПрототипMboII
АртикулSE-E471
Вариант TurboОтсутствует
Высококонцентрированная версияОтсутствует
Тип рестриктазыТип IIEiФерменты типа IIE взаимодействуют с двумя сайтами узнавания: один сайт разрезается, а второй действует как аллостерический эффекторный сайт., Тип IISiФерменты типа IIS распознают асимметричные последовательности ДНК и разрезают за пределами сайта узнавания на фиксированном расстоянии. Широко используются в Golden Gate сборке.
Сайт узнавания
5'… GAAGA(N)8▼ …3'
3'… CTTCT(N)7▲ …5'
ИсточникИз штамма E.coli несущего клонированный ген Mbo II из Moraxella bovis
Оптимальный буферSE-буфер Y (33 mM Tris-ацетат (pH 7.9 при 25°C); 10 mM магний-ацетат; 66 mM калий-ацетат; 1 mM DTT.)
Оптимальная температура37 °C
Температура инактивации65 °C
Активность в буферах
BGOWYROSE
7575255010050
Определение единицы активностиЗа единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (dam-) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активностиДНК фага лямбда (dam-)
Условия хранения10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
ЛигированиеПосле гидролиза 5-кратным избытком фермента около 60% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Сшивка более эффективна в присутствии 10% ПЭГ.
Неспецифический гидролизКартина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированиюБлокируется при перекрывании dam-метилированием (G m ATC): GAA GA TC.
С ферментом поставляется10 Х SE-буфер Y.
Литература
  1. Сторонняя публикация Brown N.L., Hutchison C.A. III, Smith M. J. Mol. Biol. 140: 143-148 (1980).
// Код для некролога