Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| ACTAGT | A↑CTAGT |
| TGATCA | TGATC↓A |
Источник: Alteromonas haloplanktis SP
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага T7 за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага Т7
Оптимальный буфер: SE-буфер B
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 100 | 75 | 25 | 25 | 75 | 100 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК фага T7 сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37LС.
Чувствительность к метилированию: не проверялось
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер B, BSA (кроме E173T и E174T)
Для фасовок Turbo (E173T и E174T) прикладывается только буфер ROSE.
Примечание:
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл.
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
Мякишева T.В., Беличенко O.A., Попиченко Д.В., Дедков В.С., Дегтярев С.Х. Неопубликованные данные (2000).
