Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| GGATCC | G↑GATCC |
| CCTAGG | CCTAG↓G |
Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген BamHI из Bacillus amyloliquefaciens H
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер G
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 25 | 100 | 75 | 75 | 25 | 100 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.6); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 100 μg/ml BSA; 1mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 50-кратным избытком фермента примерно 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированию: Не блокируется при перекрывании dam-метилированием (GmATC) : GGATCC.
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G, BSA (кроме E021T и E022T).
Для фасовок Turbo (E021T и E022T) прикладывается только буфер ROSE.
Примечание:
Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности.
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл.
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
Wilson, G.A. and Young, F.E. J. Mol. Biol. 97: 123-125 (1975).Roberts, R.J., Wilson, G.A., Young, F.E. Nature 265: 82-84 (1977)
