Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| CCTNAGC | CC↑TNAGC |
| GGANTCG | GGANT↓CG |
Источник: Из штаммов E.coli, содержащих рекомбинантные плазмиды
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага Лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер K
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 10 | 25 | 50 | 50 | 25 | 100 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 5-кратным избытком фермента около 80% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 90% из них могут быть повторно расщеплены. Сшивка лучше в присутствии 10% ПЭГ.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 1 часa при 37°С.
Чувствительность к метилированию: не проверялось
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер K
Примечание:
Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности или неполному разрезанию ДНК. Рекомендуется увеличение времени инкубации вместо использования избытка фермента
Литература:
Дегтярев С.Х., Жилкин П.A., Приходько Г.Г., Репин В.Е., Речкунова Н.И. Мол. Биол. (Москва) 23: 1051-1056 (1989).
Degtyarev S.Kh., Rechkunova N.I., Kolyhalov A.A., Dedkov V.S., Zhilkin P.A. II-Q restriction endonucleases – new class of type II enzymes. // Nucleic Acids Research, Vol.18, No. 19, 5807-5810 (1990).
Абдурашитов М.А., Томилов В.Н, Чернухин В.А., Дегтярев С.Х – corresponding author Физическая карта расщепления эндонуклеазами рестрикции Alu повторов человека // BMC Molecular Biology 2008, 9:305 – на английском языке
Абдурашитов М. А, Чернухин В. А., Томилов В. Н., Гончар Д. А., Дегтярев С. Х. Рестрикционный анализ ДНК человека – новые возможности в ДНК-диагностике // Медицинская генетика, Т.6, № 8, с 29-36, 2007
В.А. Чернухин, М.А. Абдурашитов, В.Н. Томилов, Д.А. Гончар, С.Х. Дегтярев Сравнительный рестрикционный анализ хромосомной ДНК крысы in vitro и in silico // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова, 2006, т. 2, №3, с. 39-46
