Описание
Сайт узнавания:
| CC↑TNAGC |
| GGANT↓CG |
Источник: Из штаммов E.coli, содержащих рекомбинантные плазмиды
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага Лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер K
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 10 | 25 | 50 | 50 | 25 | 100 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 5-кратным избытком фермента около 80% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 90% из них могут быть повторно расщеплены. Сшивка лучше в присутствии 10% ПЭГ.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 1 часa при 37°С.
Чувствительность к метилированию: не проверялось
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер K
Примечание:
Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности или неполному разрезанию ДНК. Рекомендуется увеличение времени инкубации вместо использования избытка фермента
Литература:
Дегтярев С.Х., Жилкин П.A., Приходько Г.Г., Репин В.Е., Речкунова Н.И. Мол. Биол. (Москва) 23: 1051-1056 (1989).
Degtyarev S.Kh., Rechkunova N.I., Kolyhalov A.A., Dedkov V.S., Zhilkin P.A. II-Q restriction endonucleases — new class of type II enzymes. // Nucleic Acids Research, Vol.18, No. 19, 5807-5810 (1990).
Дегтярев С.Х., Колыхалов А.А., Речкунова Н.И., Дедков В.С., Жилкин П.А. BsiI — новая необычная эндонуклеаза рестрикции. // Молекулярная биология, т.24, Вып. 1, 244-247 (1990).
Репин В.Е., Польшина С.В., Божко Н.А., Дегтярев С.Х. Культивирование Bacillus species 21 — продуцента эндонуклеазы рестрикции Bse21I. // Извести СО АН СССР, Серия биологических наук, вып.1, 108-111 (1989).
Дедков В.С., Дегтярев С.Х., Речкунова Н.И., Серов Г.Д., Пучкова Л.И., Вайткявичус Д.П., Кюдулене Э.-Л.Ю., Янулайтис Э.-А.А. Штамм бактерий Staphilococcus saprophyticus продуцент сайт-специфической эндонуклеазы рестрикции SsrI. // Авторское свидетельство SU 1486512 (1989).
