Описание
Сайт узнавания:
| GAAGAC(N)2↑ |
| CTTCTG(N)6↓ |
Источник: Bacillus stearothermophilus V2
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер Y
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 75 | 75 | 25 | 25 | 100 | 70 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 5-кратным избытком фермента 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 55°С.
Чувствительность к метилированию: не проверялось
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA.
Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.
Примечание:
Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности.
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл.
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
Синичкина С.A., Дедков В.С., Дегтярев С.Х. Неопубликованные данные (2000).
Дедков В.С., Дегтярев С.Х., Речкунова Н.И., Серов Г.Д., Пучкова Л.И., Вайткявичус Д.П., Кюдулене Э.-Л.Ю., Янулайтис Э.-А.А. Штамм бактерий Staphilococcus saprophyticus продуцент сайт-специфической эндонуклеазы рестрикции SsrI. // Авторское свидетельство SU 1486512 (1989).
