Glu I

5,500.00 руб.22,000.00 руб.

  • CNY: 82.10 ¥ - 328.41 ¥

MD ДНК эндонуклеаза Glu I. Метилзависимая ДНК эндонуклеаза отличается от эндонуклеаз рестрикции тем, что режет ДНК исключительно при наличии метильных групп в сайте узнавании. При отсутствии метилирования гидролиз отсутствует.

  • Концентрация: 1000 е.а./мл
  • Сайт узнавания: G(5mC)↑NG(5mC) / (5mC)GN↓(5mC)G
  • Источник: Glacial ice bacterium GL24
  • Оптимальный буфер: SE-буфер Y
  • Оптимальная температура: 37
  • Температура инактивации, 20 мин при: 80
Артикул: E519 Категория:

Описание

Сайт узнавания:

G(5mC)↑NG(5mC)
(5mC)GN↓(5mC)G

Источник: Glacial ice bacterium GL24

Определение единицы активности:

За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое для полного гидролиза единственного сайта
5`-G(5mC)NG(5mC)-3`/3`-(5mC)GN(5mC)G-5`
в 1 мкг линейной формы плазмиды pFsp4HI3/DriI за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. При этом происходит исчезновение исходной линейной формы плазмиды pFsp4HI3/DriI (см. рисунок ниже, дор. 4). Появление дополнительных продуктов гидролиза (см. рисунок ниже, дор. 4-6) является результатом последующего расщепления ДНК по сайтам 5`-GCNGC-3`/3`-CGNCG-5`, имеющим три 5-метилцитозина. Определение активности GluI
В каждом случае проводилась инкубация фермента с 1 мкг ДНК pFsp4HI3/DriI в 50 мкл реакционной смеси (см. Единица активности). После инкубации аликвота реакционной смеси 15 мкл наносилась на гель.

Дорожки:
1 и 6 — 1 Kb SE ДНК-маркеры.
2: 0 мкл Glu I
3: 0.5 мкл Glu I
4: 1 мкл Glu I
5: 2 мкл Glu I

Продукты разделены в 1,4%-ном агарозном геле в буфере TAE.

Субстрат для определения активности:

Субстрат pFsp4HI3/DriI представляет собой ДНК плазмиды pFsp4HI3, линеаризованной эндонуклеазой рестрикции DriI. Плазмида pFsp4HI3 содержит фрагмент геномной ДНК бактериального штамма Flavobacterium sp. 4H, включающий ген ДНК-метилтрансферазы M.Fsp4HI, и один канонический сайт:
5`-G(5mC)NG(5mC)-3`/3`-(5mC)GN(5mC)G-5` [2].

Оптимальный буфер: SE-буфер Y

Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:

B G O W Y ROSE
75 75 25 50 100 100

Условия хранения: 10 mM KH2PO4 (pH 7.45); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 мкг/мл BSA, 50% глицерин. Хранить при -20°С.

Лигирование:

Неспецифический гидролиз:

Не наблюдается неспецифического гидролиза при инкубации 1 ед фермента Glu I с 1 мкг ДНК фага лямбда в течение 16 часов при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.

Чувствительность к метилированию: Фермент расщепляет только C5-метилированную ДНК.
Не расщепляет немодифицированную ДНК [1].

С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.

Примечание:

Литература:

1. Чернухин В.А., Чмуж Е.В., Томилова Ю.Э., Наякшина Т.Н., Дедков В.С., Дегтярев С.Х. Штамм бактерий Glacial ice bacterium — продуцент сайт-специфической эндонуклеазы Glu I.// Патент на изобретение RU 2322492 С1 (2006)
2. Жилкина О.А., Репин В.Е., Дегтярев С.Х. Способ получения рестриктазы SfaNI, способной узнавать и расщеплять последовательность нуклеотидов 5'-GCATC(N)5^/ 3'-CGTAG(N)9^. // Авторское свидетельство SU 1442546 (1988).

Применение:
Дегтярев С.Х., Репин В.Е., Речкунова Н.И. Штамм бактерий Proteus vulgaris — продуцент рестриктазы PvuII. // Авторское свидетельство SU 1632974 (1991).
Kravets AP, Mousseau TA, Litvinchuk AV, Ostermiller Sh, Vengen GS, Grodzinski DM. Changes in wheat DNA methylation pattern after chronic seed gamma-irradiation.// Tsitol Genet. 2010 Sep-Oct;44(5):18-22. Russian.

Доступные варианты

АртикулРазмер фасовкиФасовкаЦена 
E519S50 е.а.5,500.00 руб.
E520L250 е.а.22,000.00 руб.