Pkr I

6,000.00 24,000.00 

  • CNY: 479.22 ¥ - 1,916.88 ¥

MD ДНК эндонуклеаза Pkr I.
Метилзависимая ДНК эндонуклеаза отличается от эндонуклеаз рестрикции тем, что режет ДНК исключительно при наличии метильных групп в сайте узнавании. При отсутствии метилирования гидролиз отсутствует.

  • Концентрация: 1000 е.а./мл
  • Сайт узнавания: G(5mC)N↑G(5mC) / (5mC)G↓N(5mC)G
  • Источник: Planomicrobium koreense 78k
  • Оптимальный буфер: SE-буфер Y
  • Оптимальная температура: 37
  • Температура инактивации, 20 мин при: 65

Выберите вариант:

Кат.№РазмерФасовкаЦена 
E579S50 е.а.6,000.00 
  • CNY: 479.22 ¥
E580L250 е.а.24,000.00 
  • CNY: 1,916.88 ¥

Описание

Сайт узнавания и позиция гидролиза:

G(5mC)NG(5mC) G(5mC)N↑G(5mC)
(5mC)GN(5mC)G (5mC)G↓N(5mC)G

Источник: Planomicrobium koreense 78k
Определение единицы активности:
За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое для полного гидролиза 1 мкг линейной формы плазмиды pFsp4HI3/DriI за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси (см. рисунок ниже, дор. 4).

Определение активности PkrI
В каждом случае проводилась инкубация фермента с 1 мкг ДНК pFsp4HI3/DriI в 50 мкл реакционной смеси (см. Единица активности). После инкубации аликвота реакционной смеси 15 мкл наносилась на гель.Дорожки:
1 и 6 – 1 Kb SE ДНК-маркеры.
2: 0 мкл Pkr I
3: 0.5 мкл Pkr I
4: 1 мкл Pkr I
5: 2 мкл Pkr I
Продукты разделены в 1,4%-ном агарозном геле в буфере TAE.

.
Субстрат для определения активности:
Субстрат pFsp4HI3/DriI представляет собой ДНК плазмиды pFsp4HI3, линеаризованной эндонуклеазой рестрикции DriI. Плазмида pFsp4HI3 содержит фрагмент геномной ДНК бактериального штамма Flavobacterium sp. 4H, включающий ген ДНК-метилтрансферазы M.Fsp4HI, и три сайта:
5`-G(5mC)NG(5mC)-3`/3`-CGN(5mC)G-5`[2].
Оптимальный буфер: SE-буфер Y
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:

B G O W Y ROSE
50 75 10 25 100 100

Условия хранения: 20 mM Tris-HCl (pH 7.4); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Лигирование:
Неспецифический гидролиз:
Не наблюдается неспецифического гидролиза при инкубации 2 ед фермента Pkr I с 1 мкг ДНК фага лямбда в течение 16 часов при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Чувствительность к метилированию: Фермент расщепляет только метилированную ДНК.
Не расщепляет немодифицированную ДНК [1].
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.
Примечание:
Литература:
1.В.А. Чернухин, Наякшина Т.Н, Гончар Д.А., Томилова Ю.Э., Тарасова М.В., Дедков В.С., Михненкова Н.А., Дегтярёв С.Х. Новая сайт-специфическая метилзависимая ДНК эндонуклеаза PkrI узнаёт и расщепляет метилированную последовательность 5′-GCN^GC-3’/3′-CG^NCG-5′, содержащую не менее 3-х 5-метилцитозинов // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова. – 2011. – Т. 7 – № 3 – С. 35 – 42
2. Чмуж Е.В., Каширина Ю.Г., Томилова Ю.Э., Чернухин В.А., Охапкина С.С., Гончар Д.А., Дедков В.С., Абдурашитов М.А., Дегтярев С.Х. Клонирование генов, сравнительный анализ структуры белков системы рестрикции-модификации Fsp4HI и биохимическая характеристика рекомбинантной ДНК-метилтрансферазы M.Fsp4HI. // Молекулярная биология, т.41, №1, с. 43-50 (2007)