Mte I

2,200.00 руб.8,800.00 руб.

  • CNY: 32.84 ¥ - 131.37 ¥

MD ДНК эндонуклеаза Mte I. Метилзависимая ДНК эндонуклеаза отличается от эндонуклеаз рестрикции тем, что режет ДНК исключительно при наличии метильных групп в сайте узнавании. При отсутствии метилирования гидролиз отсутствует.

  • Концентрация: 20000 е.а./мл
  • Сайт узнавания: G(5mC)G(5mC)↑NG(5mC)G(5mC) / (5mC)G(5mC)GN↓(5mC)G(5mC)G
  • Источник: Из штамма E.coli, несущего клонированный ген Mte I из Microbacterium testaceum 17B
  • Оптимальный буфер: SE-буфер W
  • Оптимальная температура: 55
  • Температура инактивации, 20 мин при: N
Артикул: E553 Категория:

Описание

Сайт узнавания:

G(5mC)G(5mC)↑NG(5mC)G(5mC)
(5mC)G(5mC)GN↓(5mC)G(5mC)G

Источник: Из штамма E.coli, несущего клонированный ген Mte I из Microbacterium testaceum 17B

Определение единицы активности:

За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое для полного гидролиза 1 мкг ДНК плазмиды pHspAI10/DriI дополнительно метилированной M.Fsp4HI за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смесиОпределение активности MteI
В каждом случае проводилась инкубация фермента с 1 мкг ДНК pHspAI10/DriI/metM.Fsp4HI в 50 мкл реакционной смеси (см. Единица активности). После инкубации аликвота реакционной смеси 15 мкл наносилась на гель.

Дорожки: 
2 — Контрольная ДНК pHspAI10/DriI/metM.Fsp4HI, 
3 — 0.5 мкл MteI (разб. 1/40), 
4 — 1 мкл MteI (разб. 1/40), 
5 — 2 мкл MteI (разб. 1/40), 
6 — 1 мкл неразбавленного фермента MteI, 
1 и 7- 1 Kb SE ДНК-маркеры. 

Продукты разделены в 1%-ном агарозном геле в буфере TAE

Определение активности MteI

Субстрат для определения активности:

Субстрат pHspAI10/DriI/metM.Fsp4HI представляет собой ДНК плазмиды pHspAI10, линеаризованной эндонуклеазой рестрикции DriI и метилированной ДНК-метилтрансферазой Fsp4HI. Плазмида pHspAI10 содержит ген ДНК-метилтрасферазы M.HspAI, которая модифицирует сайт узнавания
5`-GCGC-3` с образованием
5`-G(5mC)GC-3`/3`-CG(5mC)G-5`.
Кроме того, данная плазмида дополнительно метилирована ДНК-метилтрасферазой М.Fsp4HI, которая модифицирует сайт
5`-GCNGC-3` с образованием
5`-G(5mC)NGC-3`/3`-CGN(5mC)G-5`.
В результате в используемом субстрате имеется один канонический сайт узнавания МteI:
5`-G(5mC)G(5mC)NG(5mC)G(5mC)-3`/3`-(5mC)G(5mC)GN(5mC)G(5mC)G-5`.
МteI может также расщеплять сайт узнавания, включающий шесть 5-метилцитозинов [1], однако активность фермента в этом случае меньше более чем на порядок.

Оптимальный буфер: SE-буфер W

Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:

B G O W Y ROSE
25 75 75 100 50 100

Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200мкг/мл BSA, 50% глицерин. Хранить при -20°С.

Лигирование:

Неспецифический гидролиз:

Не наблюдается неспецифического гидролиза при инкубации 40 ед фермента Mte I с 1 мкг ДНК фага лямбда в течение 16 часов при 55°С в 50 мкл реакционной смеси.

Чувствительность к метилированию: Фермент расщепляет только С5-метилированную ДНК.

С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W, pHspAI10/DriI дополнительно метилированная M.Fsp4HI .

Примечание:

Литература:

1. Degtyarev S.Kh., Rechkunova N.I., Zernov Yu.P., Dedkov V.S., Chizikov V.E., Van Calligan M., Williams R., Murray E. Bsp24I, a new unusual restriction endonuclease. // Gene, No.131, 93-95 (1993).
2. Абдурашитов М.А., Куксова А.Н., Акишев А.Г., Землянская Е.В., Дегтярев С.Х.MteI-ПЦР анализ – новый метод определения статуса метилирования GC-богатых регуляторных участков генов-онкосупрессоров человека// Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова, Т. 9 , № 3 ,с. 15-23 (2013)

Доступные варианты

АртикулРазмер фасовкиФасовкаЦена 
E553S1000 е.а.2,200.00 руб.
E554L5000 е.а.8,800.00 руб.