Описание
Сайт узнавания:
| GGCCNNNN↑NGGCC |
| CCGGN↓NNNNCCGG |
Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Sfi I из Streptomyces fimbriatus
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага T7 за 1 час при 50°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага Т7
Оптимальный буфер: SE-буфер G
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 75 | 100 | 25 | 25 | 25 | 75 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. В присутствии 10% ПЭГ сшивка проходит лучше.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 50°С.
Чувствительность к метилированию: Блокируется при перекрывании dcm метилированием (CmCWGG): GGCCWGGNNNGGCC.Не блокируется при перекрывании dcm метилированием (CmCWGG): GGCCNNNNNNGGCCWGG.
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G, BSA.
Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.
Примечание:
При 37°C активность 75%-100% от максимальной.
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл.
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
Qiang, B.-Q., Schildkraut, I. Nucleic Acids Res. 12: 4507-4515 (1984).
Дегтярев С.Х., Репин В.Е., Речкунова Н.И., Чижиков В.Е., Малыгин Э.Г., Михайлов В.В., Рассказов В.А. Определение субстратной специфичности эндонуклеазы рестрикции VspI. // Биоорганическая химия, Т.13, № 3, 420-421 (1987).
