Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| CCTNAGG | CC↑TNAGG |
| GGANTCC | GGANT↓CC |
Источник: Bacillus species 21
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (HindIII-digest) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда (HindIII-digest)
Оптимальный буфер: SE-буфер Y
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 50 | 50 | 10 | 25 | 100 | 40 |
Условия хранения: 10 mM KH2PO4(pH 7.4); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 2-кратным избытком фермента около 50% фрагментов ДНК сшиваются высокоактивной ДНК-лигазой в присутствии 10%ПЭГ и более 90% из них могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированию: не проверялось
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y
Примечание:
Литература:
Дегтярев С.Х., Речкунова Н.И., Репин В.E., Колыхалов A.A., Нетесов С.В. Изв. Сиб. Отд. Акад. Наук СССР 1: 138-139 (1990).
В.А. Чернухин, М.А. Абдурашитов, В.Н. Томилов, Д.А. Гончар, С.Х. Дегтярев Сравнительный рестрикционный анализ хромосомной ДНК крысы in vitro и in silico // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова, 2006, т. 2, №3, с. 39-46
