Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| GTCTCN | GTCTCN↑ |
| CAGAG(N)5 | CAGAG(N)5↓ |
Источник: Bacillus stearothermophilus MA
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер W
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 25 | 50 | 50 | 100 | 75 | 100 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 100 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 50-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 80% из них могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 100 ед фермента в течение 16 часов при 55°С.
Чувствительность к метилированию: не проверялось
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W, BSA
Примечание:
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл.
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
Чернухин В.А., Михненкова Н.А., Килева Е.В., Мезенцева Н.В., Дедков В.С., Дегтярев С.Х. Неопубликованные данные (2005)
Абдурашитов М.А., Томилов В.Н, Чернухин В.А., Дегтярев С.Х – corresponding author Физическая карта расщепления эндонуклеазами рестрикции Alu повторов человека // BMC Molecular Biology 2008, 9:305 – на английском языке
Абдурашитов М. А, Чернухин В. А., Томилов В. Н., Гончар Д. А., Дегтярев С. Х. Рестрикционный анализ ДНК человека – новые возможности в ДНК-диагностике // Медицинская генетика, Т.6, № 8, с 29-36, 2007
