BstFN I

Описание

[:ru]Сайт узнавания и позиция гидролиза:

Источник: Bacillus stearothermophilus FN
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 60°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер Y
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:

Условия хранения: 20 mM Tris-HCl (pH 7.5); 300 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 10 mM MgCl₂; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°C.
Лигирование:
После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 60°C.
Чувствительность к метилированию: Блокируется CG метилированием
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y
Примечание:
Литература:
Наякшина T.Н., Лебедева Н.A., Дедков В.С., Абдурашитов M.A., Дегтярев С.Х. Неопубликованные данные (1999).
В.А. Чернухин, М.А. Абдурашитов, В.Н. Томилов, Д.А. Гончар, С.Х. Дегтярев Сравнительный рестрикционный анализ хромосомной ДНК мыши in vitro и in silico // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова, 2007, 3, №4, с. 19-27.
В.А. Чернухин, М.А. Абдурашитов, В.Н. Томилов, Д.А. Гончар, С.Х. Дегтярев Сравнительный рестрикционный анализ хромосомной ДНК крысы in vitro и in silico // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова, 2006, т. 2, №3, с. 39-46 [:en]Recognition site and hydrolysis position:

Source: Bacillus stearothermophilus FN
Unit definition:
One unit of the enzyme is the amount required to hydrolyze 1 μg of Lambda DNA in 1 hour at 60°C in a total reaction volume of 50 μl.
Assayed on:
Lambda DNA
Optimal SE-buffer: SE-buffer Y
Enzyme activity (%):

Storage conditions: 20 mM Tris-HCl (pH 7.5); 300 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 10 mM MgCl₂; 200 μg/ml BSA, 7 mM 2-mercaptoethanol and 50% glycerol; Store at -20°C.
Ligations:
After 5-fold overdigestion with enzyme more than 95% of the DNA fragments can be ligated and recut.
Non-specific hydrolisis:
No nonspecific activity was detected after incubation of 1 μg of Lambda DNA with 10 u.a. of enzyme for 16 hours at 60°C. Reagents Supplied with Enzyme 10 X SE-buffer Y
Reagents Supplied with Enzyme:
Methylation sensitivity: Blocked by CG methylation
Notes:
References:
Nayakshina, T.N., Lebedeva, N.A., Dedkov, V.S., Abdurashitov, M.A., Degtyarev, S.K. Unpublished observations (1999).
Chernukhin V.A, Abdurashitov M.A., Tomilov V.N., Gonchar D.A., Degtyarev S.Kh. Comparative analysis of mouse chromosomal DNA digestion with restriction endonucleases in vitro and in silico // Translated from «Ovchinnikov bulletin of biotechnology and physical and chemical biology» V.3, No 4, pp 19-27, 2007
V.A. Chernukhin, M.A. Abdurashitov, V.N. Tomilov, D.A. Gonchar, S.Kh. Degtyarev Comparative restriction enzymes analysis of rat chromosomal DNA in vitro and in silico // Translated from «Ovchinnikov bulletin of biotechnology and physical and chemical biology» V.2, No 3, pp 39-46, 2006 [:]