Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| GTYRAC | GTY↑RAC |
| CARYTG | CAR↓YTG |
Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Hind II из Haemophilus influenzae
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер G
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 75 | 100 | 25 | 25 | 75 | 50 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 10-кратным избытком фермента около 60% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Cшивка более эффективна в присутствии 10% ПЭГ.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированию: не проверялось
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G, BSA .
Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.
Примечание:
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл.
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
Kelly T.J. Jr., Smith H.O. J. Mol. Biol. 51: 393-409 (1970).
