Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| GGNNCC | GGN↑NCC |
| CCNNGG | CCN↓NGG |
Источник: Pseudomonas species N4
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер Y
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 10 | 10 | 10 | 25 | 100 | 50 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0,1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированию: Блокируется метилированием
5`- GGNN(5mC)C – 3`/3`- C(5mC)NNGG – 5` и
5`- GGNN(5mC)С – 3`/3`- CCNNGG – 5`
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.
Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.
Примечание:
Литература:
Абдурашитов M.A., Килева E.В., Шевченко A.В., Дедков В.С., Дегтярев С.Х. Неопубликованные данные (1995).
В.А. Чернухин, М.А. Абдурашитов, В.Н. Томилов, Д.А. Гончар, С.Х. Дегтярев Сравнительный рестрикционный анализ хромосомной ДНК мыши in vitro и in silico // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова, 2007, 3, №4, с. 19-27.
