Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| ATTTAAAT | ATTT↑AAAT |
| TAAATTTA | TAAA↓TTTA |
Источник: Streptococcus milleri S
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага T7 (SspI-digest) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага Т7 (SspI-digest)
Оптимальный буфер: SE-буфер O
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 25 | 25 | 100 | 75 | 25 | 10 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 250 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 100 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 20-кратным избытком фермента > 95% фрагментов ДНК сшиваются высокоактивной T4 ДНК-лигазой в присутствии 10 % ПЭГ
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированию: не проверялось
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер O, BSA.
Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер O+.
Примечание:
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл.
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
Дедков В.С., Бондарь T.С., Шевченко A.В., Дегтярев С.Х. Мол. Ген. Микробиол. Вирусол. 1: 23-27 (2000).
