Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| GGTACC | G↑GTACC |
| CCATGG | CCATG↓G |
Источник: Acinetobacter calcoaceticus 65
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда(dcm-) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда (dcm-)
Оптимальный буфер: SE-буфер W
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 10 | 25 | 75 | 100 | 10 | 100 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 200ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 10-кратным избытком фермента около 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированию: Блокируется при перекрывании dcm-метилированием (СmCWGG): GGTACCWGG.
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W.
Для фасовок Turbo (E003T и E004T) прикладывается только буфер ROSE.
Примечание:
Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности.
Литература:
Приходько Г.Г., Речкунова Н.И., Репин В.E., Дегтярев С.Х. Сиб. Биол. Ж. 1: 59-60 (1991).
