Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| AGCT | AG↑CT |
| TCGA | TC↓GA |
Источник: Arthrobacter luteus B
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер B
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 100 | 75 | 10 | 10 | 75 | 60 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 10-кратным избытком фермента около 80% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированию: Гидролизует метилированный и полуметилированный по внутреннему цитозину сайт:
A G (5mC)T и AG(5mC)T
T(5mC) G A TC G A
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер B, BSA
Примечание:
AluBI является изошизомером AluI
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл.
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
Чернухин В.А., Болтенгаген А.А., Тарасова Г.В, Дедков В.С., Дегтярёв С.Х Новая эндонуклеаза рестрикции AluBI из Arthrobacter luteus B- изошизомер AluI, нечувствительный к присутствию 5-метилцитозина в сайте узнавания AGCT // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова. – 2007. – Т. 3 №1. – С. 21-27
