Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| ATCGAT | AT↑CGAT |
| TAGCTA | TAGC↓TA |
Источник: Bacillus stearothermophilus 29
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (dam-) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда (dam-)
Оптимальный буфер: SE-буфер G
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 25 | 100 | 50 | 50 | 75 | 100 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 250 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.
Чувствительность к метилированию: Блокируется при перекрывании dam-метилированием (GmATC): GATCGATC.
Блокируется CG метилированием.
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G, BSA (кроме E205T и E206T).
Для фасовок Turbo (E205T и E206T) прикладывается только буфер ROSE.
Примечание:
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
Репин В.E., Дегтярев С.Х. Непубликованные данные
