Описание
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| CCWGG | CC↑WGG |
| GGWCC | GGW↓CC |
Источник: Bacillus stearothermophilus 2U
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 60°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда
Оптимальный буфер: SE-буфер G
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 75 | 100 | 50 | 50 | 10 | 50 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°C.
Лигирование:
После гидролиза 2-кратным избытком фермента <5% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 60°C.
Чувствительность к метилированию: Не блокируется при перекрывании Dcm-метилированием (CmCWGG): CCWGG.
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G, BSA
Примечание:
Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл
BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.
Литература:
Мякишева Т.В., Дегтярев С.Х. Неопубликованные данные (1995).
В.А. Чернухин, М.А. Абдурашитов, В.Н. Томилов, Д.А. Гончар, С.Х. Дегтярев Сравнительный рестрикционный анализ хромосомной ДНК мыши in vitro и in silico // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова, 2007, 3, №4, с. 19-27.
Абдурашитов М.А., Томилов В.Н, Чернухин В.А., Дегтярев С.Х – corresponding author Физическая карта расщепления эндонуклеазами рестрикции Alu повторов человека // BMC Molecular Biology 2008, 9:305 – на английском языке
Абдурашитов М. А, Чернухин В. А., Томилов В. Н., Гончар Д. А., Дегтярев С. Х. Рестрикционный анализ ДНК человека – новые возможности в ДНК-диагностике // Медицинская генетика, Т.6, № 8, с 29-36, 2007
М.А. Абдурашитов, В.Н. Томилов, В.А. Чернухин, Д.А. Гончар, С.Х. Дегтярев Метод рестрикционного анализа геномов млекопитающих in silico // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова, 2006, т. 2, №3, с 29-38
В.С. Дедков, Н.А. Михненкова, Л.П. Власенко, Ю.Э. Томилова, Ю.Г. Каширина, Д.А. Гончар, С.Х. Дегтярёв Эндонуклеаза рестрикции AjnI из Acinetobacter johnsonii R2 — изошизомер EcoRII, узнаёт 5’-↓CCWGG-3’, но не блокируется dcm-метилированием // Биотехнология, 2004, № 3, С.19-24
