Description
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
| GATC | ↑GATC |
| CTAG | CTAG↓ |
Источник: Bacillus stearothermophillus MB
Определение единицы активности:
За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (dam-) за 1 час при 65°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
ДНК фага лямбда (dam-)
Оптимальный буфер: SE-буфер O
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
| B | G | O | W | Y | ROSE |
| 10 | 25 | 100 | 75 | 10 | 100 |
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С.
Лигирование:
После гидролиза 5-кратным избытком фермента более 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены
Неспецифический гидролиз:
Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 65°С
Чувствительность к метилированию: Блокируется при перекрывании dam-метилированием (GmATC):GATC. Не гидролизует полуметилированный по аденину сайт : 5`-GmATC-3` / 5`-GATC-3`.
Не блокируется CG метилированием.
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер O
Примечание:
Литература:
Коваленко К., Килева Е.В., Мезенцева Н.В., Михненкова Н.А., Дедков В.С., Дегтярев С.Х.; Неопубликованные данные (2004).
